猪瘟免提取试剂

猪瘟免提取试剂使用说明书

猪瘟免提取试剂又称非洲猪瘟病毒荧光PCR试剂盒，猪瘟免提取试剂能够对非洲猪瘟病毒DNA进行高灵敏度和高特异性的检测，应用于临床确诊以及家猪和 野猪中ASFV感染的筛查。

（快提核酸扩增试剂盒）

【产品名称】

通用名称：猪瘟免提取试剂（PCR荧光探针法） 英文名称：Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus （PCR Fluorescence Probing）

［预期用途］

本试剂盒主要用于检测疑似感染猪抗凝血及临床病料中的非洲猪瘟病毒（ASFV,African Swine Fever Virus）核酸，适用于非洲猪瘟病毒的检测、辅助诊断和流行病学调查。

【试剂盒组分】

1、试剂盒组成及贮藏条件

2、需自备材料：生理盐水、无菌枪头、荧光PCR专用反应管、记号笔等。

【操作步骤】一、样品制备

1、血液样品：采集抗凝血（抗凝剂为EDTA）或血清样品，编号备用。

2、组织样品：采集脾脏、肝脏、淋巴结、扁桃体等病变组织样品或软蜱0.1g（黄豆粒大小），眼科剪剪碎于组织匀浆器或研钵中充分匀浆或研磨，再加1mL生理盐水混匀，4°C条件下8000rpm/分钟离心2分钟，取上清液于灭菌离心管中，编号备用。

二、DNA提取

取反应液A 20μL分别加入到新的1.5mL离心管，加入抗凝而或血清或组织上清液2μL混匀，室温（20°C左右）静置3分钟，加入反应液B 20μL,吹打混匀即可，若为抗凝全血，则需8000rpm/分钟再离心2分钟后做为待检DNA溶液。

二、PCR扩增

1、配液：取出PCR反应液、酶混合液，在室温完全融化后，充分混匀，瞬离，可将酶混合液全部取岀直接加入到PCR反应液中，充分混匀，瞬离后按每份20μL分装使用；或按照每份PCR反应液17μL,酶混合液3μL的比例取一定的试验用量，混合两种反应液,瞬离后按照每份20μL分装到专用荧光PCR 反应管中，剩余试剂立即冻存；（操作过程要注意避光）

2、加样扩增：分别向上述PCR反应管中加入5μL样本 DNA或阴性对照或阳性对照，混匀并瞬离,放入荧光PCR仪上运行以下程序：

步骤 条件 循环数 UNG处理 50°C：2分钟1 预变性 95°C：3分钟1 预扩増 95°C：8秒55C：8秒5 PCR扩增 95°C：8秒55°C：8秒40

荧光通道选择FAM,在40循环阶段每个循坏的55°C时收集荧光信号。设置扩增体系为25μL,同时要选择 passive reference 和 quencher 为 none 的模式。

(注:若荧光PCR仪(如ABI7500)按说明书中的反应程序设置后因持温时间短无法运行,可将预扩增和PCR扩增条件变更为95°C：5秒55°C：30秒。)

【结果判定】1、基线和阈值设定；基线调整取6-15个循环的荧光信号，阈值设定以阈值线刚好超过阴性对照检测荧光曲线的最高点为原则。

2、质量控制：反应结束后，阴性对照的检测结果应无特定的扩增曲线，Ct值为＞38或无；阳性对照 的Ct值应≤30.0,且明显的扩增曲线；否则实验视为无效。

3、样品判定：待检样品荧光信号有指数型增加，且结果显示Ct值<35.0,报告为阳性；未检测到Ct 值或Ct值＞38或无明显扩增曲线，则样品判定为阴性。35≤Ct值≤8时，复检一次，重复结果为阳性者判定为阳性，否则判定为阴性。

【注意事项】1、实验前请仔细阅读本试剂盒说明书，严格按照操作步骤执行，在操作过程中对时间、试剂体积等精确控制可以获得最好的结果。

2、实验室应严格按照有关规定分区管理。各区间人员、器材、试剂及空气流向应有产格要求。

3、有关耗材确保洁净、无菌，核酸提取完成后尽快进入下一步试验或冷冻保存。

4、预混后的试剂应尽量在短期内使用完毕，户外使用应在加冰袋的泡沫盒保存，每日试验完毕应及时冷冻保存。

5、对于荧光PCR管要避免徒手或使用过的手套接触，检测过程中使用不带荧光物质一次性乳胶手套。

6、冻存试剂使用前应于室温下完全融化，充分混匀，瞬时离心使液体完全沉于管底。

7、样品、阴性对照封盖后，在通风环境添加阳性对照并及时封盖，避免组分间及气溶胶等假阳性污染。

8、扩增反应完毕后的PCR管严禁开盖,应和试验产生的其它废弃物一起及时收集,远离PCR实验室进行无害化处理。

【规格】50头份/盒。

【贮藏与有效期】-20°C以下避光保存，有效期12个月。

仅供兽医诊断使用

猪瘟免提取试剂一句话卖点：

猪瘟免提取试剂（非洲猪瘟病毒荧光PCR试剂盒），免核酸提纯3分钟快速制备检测模板，高灵敏特异性检测非洲猪瘟病毒DNA，高效完成猪场、野猪样本筛查与疫病确诊，缩短检测流程、降低气溶胶污染风险。

猪瘟免提取试剂常见问题解答：

问题1：猪瘟免提取试剂的核心作用与适用检测样本有哪些？

答：该试剂盒采用荧光PCR探针法检测非洲猪瘟病毒核酸，用于疫病辅助诊断、流行病学调查。可检测EDTA抗凝血、血清，脾脏、肝脏、淋巴结、扁桃体等病变组织及软蜱样本，覆盖家猪、野猪各类临床病料筛查。

问题2：猪瘟免提取试剂相比传统提取试剂盒有什么核心优势？

答：无需磁珠、柱式核酸提纯，仅两步试剂混匀3分钟完成模板制备，大幅缩短前处理时长；简化操作减少人为误差，降低开盖气溶胶污染概率；配套完整阴阳性对照，检测特异性、灵敏度稳定，适配主流荧光PCR仪器。

问题3：猪瘟免提取试剂单盒规格、市场售价与单次检测成本如何？

答：产品规格为50头份/盒，单盒售价700元，单次检测试剂成本约14元。整套试剂盒包含反应液、酶液、阴阳对照全套组分，无需额外采购提取配套试剂，仅自备生理盐水、无菌枪头等基础耗材。

问题4：猪瘟免提取试剂贮藏条件、有效期与短途运输保存要求是什么？

答：需-20℃以下避光密封贮藏，未开封有效期12个月；户外现场检测需搭配冰袋泡沫盒低温存放，每日实验结束后立即放回冷冻环境；试剂解冻后充分混匀瞬时离心使用，避免反复多次冻融影响检测活性。

问题5：使用猪瘟免提取试剂做检测，完整操作流程包含哪几个关键环节？

答：分为三步：1.样品制备，血液直接取样，组织研磨离心取上清；2.DNA免提取，两种裂解试剂室温混匀3分钟制模板；3.PCR配液、加样，设置指定温控程序扩增，依据FAM通道荧光曲线判定样本阴阳性。

问题6：猪瘟免提取试剂检测结果如何判定？出现可疑Ct区间样本该怎么处理？

答：阳性对照Ct≤30、阴性对照无扩增曲线实验方有效；样本Ct＜35判定阳性，Ct＞38为阴性；Ct在35-38区间属于可疑结果，需重新提取模板复检，复检仍出现阳性曲线则判定为阳性。

问题7：操作猪瘟免提取试剂有哪些关键防污染注意事项？

答：实验室严格分区操作，耗材全部无菌一次性；阳性对照最后添加并快速封盖；扩增结束PCR管禁止开盖，统一无害化处理；操作全程佩戴无荧光一次性手套，避免徒手触碰荧光PCR反应管管壁。

问题8：猪瘟免提取试剂是否需要配套专用检测仪，普通荧光PCR仪能否使用？

答：无需专用检测仪，市面常规荧光定量PCR仪均可适配，荧光通道选择FAM，被动参考与淬灭设置为无；部分ABI7500类机型可微调温控时长适配程序，仅需按照说明书修改预扩增、扩增阶段温育时间即可正常运行。

更新时间：2026-09-06